Insegnamento METODOLOGIE BIOCHIMICHE
| Nome del corso | Biologia |
|---|---|
| Codice insegnamento | GP004082 |
| Curriculum | Biosanitario |
| Docente responsabile | Serena Porcellati |
| Docenti |
|
| Ore |
|
| CFU | 6 |
| Regolamento | Coorte 2021 |
| Erogato | Erogato nel 2021/22 |
| Erogato altro regolamento | |
| Attività | Affine/integrativa |
| Ambito | Attività formative affini o integrative |
| Settore | BIO/10 |
| Tipo insegnamento | Opzionale (Optional) |
| Tipo attività | Attività formativa monodisciplinare |
| Lingua insegnamento | ITALIANO |
| Contenuti | Tecniche spettrofotometriche. Tecniche elettroforetiche. Spettrometria di massa applicata allo studio delle proteine |
| Testi di riferimento | Keith Wilson and John Walker: Biochimica e biologia molecolare:Principi e tecniche¿ EDs. 2019 Raffaello Cortina Editore. ¿ M.Maccarrone: Metodologie Biochimiche e Biomolecolari, Zanichelli Editore Bonaccorsi, Contestabile, Di Salvo -Metodologie biochimiche-Casa Editrice Ambrosiana. Distrib. Zanichell |
| Obiettivi formativi | Conoscenze: lo studente deve conoscere le metodiche spettrofotometriche e elettroforetiche per lo studio delle biomolecole principali biomolecole, nonchè le metodiche di spettrometria di massa per l'identificazione di proteine Capacità: lo studente deve essere in grado di impostare un protocollo per la separazione e l'analisi quali/quantitativa delle principali biomolecole mediante spettrofotometria nonchè per l'identificazione di specifiche proteine mediante spettrometria di massa |
| Prerequisiti | Conoscenze di base di Chimica Organica e di Biochimica |
| Metodi didattici | Lezioni frontali in aula svolte con l'ausilio di proiezioni di diapositive |
| Altre informazioni | Frequenza facoltativa . |
| Modalità di verifica dell'apprendimento | Colloquio su gli argomenti del corso durante l'esame completo tenuto insieme agli altri docenti |
| Programma esteso | Tecniche spettroscopiche-, spettroscopie di emissione e di assorbimento, assorbanza e trasmittanza, spettrofotometria UV/visibile, transizioni elettroniche, caratteristiche dei cromofori, legge di Lambert-Beer, lo spettrofotometro applicazioni della spettrofotometria UV/visibile, Rette di tarature per analisi quantitative. Metodi per il dosaggio delle proteine: bradford, biureto, BCA, Lowry. Principi della spettroscopia di fluorescenza, alcune applicazioni in biochimica. lo spettrofluorimetro, Fosforescenza (cenni)- (2.5 ore). Tecniche elettroforetiche: Principi generali. Elettroforesi su Gel di agarosio e poliacrilammide (PAGE) e criteri di utilizzo. Elettroforesi orizzontale e verticale Elettroforesi su SDS-PAGE ed elettroforesi in condizioni native. Colorazione dei gel: Comassie brilliant Blue, Silver staining, colorandi fluorescenti e criteri di utilizzo; bromuro di etidio. (2.5 ore). Techiche di Blotting: principi generali, cenni di Southern e Northern Blotting., Wester Blotting: trasferimento, Rivelazione delle proteine: tramite colorazione su membrana (Ponceau S) o con anticorpi coniugati ad enzimi. Immunoblotting: le diverse fasi (2.5 ore). Proteomica: principi generali, approccio gel based e gel free. Elettroforesi bidimensionale: Preparazione del campione, isolettrofocalizzazione, equilibrazione, SDS Page. Colorazione dei gel. Techica DIGE. Analisi densitometrica differenziale dei gel. Spettrometria di massa e fingerprinting proteico: MALDI-TOF, and ESI-. Analisi in banca dati per l'identificazione della proteina (2.5 ore) |